Le dithiothréitol (DTT) est un agent réducteur couramment utilisé, également connu sous le nom de nouvel additif vert.C'est un petit composé organique moléculaire avec deux groupes mercaptan (-SH).En raison de ses propriétés réductrices et de sa stabilité, le DTT est largement utilisé dans les expériences de biochimie et de biologie moléculaire.
Le rôle principal du DTT est de réduire les liaisons disulfure dans les protéines et autres biomolécules.La liaison disulfure est un élément important du repliement et de la stabilité des protéines, mais dans certaines conditions expérimentales, telles que l'analyse SDS-PAGE réductible, la recombinaison et le repliement des protéines, il est nécessaire de réduire la liaison disulfure à deux groupes thiol pour démêler la structure spatiale de la protéine.Le DTT peut réagir avec les liaisons disulfure pour les réduire en groupes mercaptan, ouvrant ainsi la structure spatiale de la protéine et la rendant facile à analyser et à manipuler.
Le DTT peut également être utilisé pour protéger l’activité et la stabilité des enzymes.Dans certaines réactions catalysées par des enzymes, l'activité de l'enzyme peut être réduite par l'oxydant.Le DTT peut réagir avec les oxydants pour les réduire en substances inoffensives, protégeant ainsi l'activité et la stabilité de l'enzyme.
Comparé aux agents réducteurs traditionnels tels que le β-mercaptoéthanol (β-ME), le DTT est considéré comme un agent réducteur plus sûr et plus stable.Il est non seulement stable en solution aqueuse, mais conserve également ses propriétés réductrices à haute température et dans des conditions acido-basiques.
L'utilisation de la TNT est relativement simple.En général, le DTT est dissous dans un tampon approprié puis ajouté au système expérimental.La concentration optimale de DTT doit être déterminée en fonction de l'expérience spécifique et est généralement utilisée dans la plage de 0,1 à 1 mM.Des concentrations plus faibles peuvent réduire les effets indésirables sur la croissance cellulaire et réduire la cytotoxicité due à la surexpression des protéines cibles.Des concentrations plus élevées peuvent entraîner une charge métabolique cellulaire excessive, affectant la croissance cellulaire et l’efficacité de l’expression.
La manière de déterminer la concentration optimale peut consister à évaluer le niveau d’expression de la protéine cible en effectuant des tests d’induction IPTG à différentes concentrations.Des tests de culture à petite échelle peuvent être effectués en utilisant une gamme de concentrations d'IPTG (par exemple 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) et l'effet d'expression à différentes concentrations peut être évalué en détectant le niveau d'expression de la protéine cible (par exemple Western détection par transfert ou fluorescence).Selon les résultats expérimentaux, la concentration ayant le meilleur effet d’expression a été sélectionnée comme concentration optimale.
En outre, vous pouvez également vous référer à la littérature pertinente ou à l'expérience d'autres laboratoires pour comprendre la plage de concentrations d'IPTG couramment utilisée dans des conditions expérimentales similaires, puis optimiser et ajuster en fonction des besoins expérimentaux.
Il est important de noter que la concentration optimale peut varier en fonction des différents systèmes d’expression, protéines cibles et conditions expérimentales. Il est donc préférable d’optimiser au cas par cas.
En résumé, le DTT est un agent réducteur couramment utilisé qui peut être utilisé pour réduire les liaisons disulfure dans les protéines et autres biomolécules et pour protéger l’activité et la stabilité des enzymes.Il a été largement utilisé dans les expériences de biochimie et de biologie moléculaire.
Heure de publication : 28 septembre 2023