Comment déterminer la concentration optimale ?
Pour l’inducteur IPTG (isopropyl-bêta-d-thiogalactoside), plus la concentration est élevée, mieux c’est.La concentration optimale dépend des conditions expérimentales spécifiques et de l'effet d'induction souhaité.
Généralement, la concentration d'IPTG est utilisée dans la plage de 0,1 à 1 mM.Des concentrations plus faibles peuvent réduire les effets indésirables sur la croissance cellulaire et réduire la cytotoxicité due à la surexpression des protéines cibles.Des concentrations plus élevées peuvent entraîner une charge métabolique cellulaire excessive, affectant la croissance cellulaire et l’efficacité de l’expression.
La manière de déterminer la concentration optimale peut consister à évaluer le niveau d’expression de la protéine cible en effectuant des tests d’induction IPTG à différentes concentrations.Des tests de culture à petite échelle peuvent être effectués en utilisant une gamme de concentrations d'IPTG (par exemple 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) et l'effet d'expression à différentes concentrations peut être évalué en détectant le niveau d'expression de la protéine cible (par exemple Western détection par transfert ou fluorescence).Selon les résultats expérimentaux, la concentration ayant le meilleur effet d’expression a été sélectionnée comme concentration optimale.
En outre, vous pouvez également vous référer à la littérature pertinente ou à l'expérience d'autres laboratoires pour comprendre la plage de concentrations d'IPTG couramment utilisée dans des conditions expérimentales similaires, puis optimiser et ajuster en fonction des besoins expérimentaux.
Il est important de noter que la concentration optimale peut varier en fonction des différents systèmes d’expression, protéines cibles et conditions expérimentales. Il est donc préférable d’optimiser au cas par cas.
Heure de publication : 28 septembre 2023