4-Nitrophényl bêta-D-galactopyranoside CAS : 200422-18-0

Effet : ONPG est un substrat spécifiquement utilisé pour détecter la présence et l'activité de l'enzyme β-galactosidase.Lorsque l'enzyme β-galactosidase est présente et active, elle divise l'ONPG en deux produits : l'o-nitrophénol et un dérivé du galactose.La libération d'o-nitrophénol entraîne un changement de couleur jaune, qui peut être mesuré à l'aide d'un spectrophotomètre.

Application : L’ONPG a plusieurs applications dans la recherche en biologie moléculaire et biochimie :

Détermination de l'activité β-galactosidase : L'ONPG est couramment utilisé pour mesurer et quantifier l'activité de l'enzyme β-galactosidase.Le taux de formation d'o-nitrophénol, qui est directement proportionnel à l'activité enzymatique, peut être mesuré par spectrophotométrie.

Expression et régulation des gènes : L'ONPG est souvent utilisé dans des expériences liées aux études sur l'expression et la régulation des gènes.Il est fréquemment utilisé dans les tests de protéines de fusion, tels que le système de fusion lacZ couramment utilisé, pour étudier l'expression de gènes sous le contrôle de promoteurs spécifiques.L'activité bêta-galactosidase mesurée à l'aide de l'ONPG donne un aperçu du niveau d'expression des gènes.

Dépistage de l'activité β-galactosidase : ONPG peut être utilisé comme méthode de dépistage colorimétrique dans la technologie de l'ADN recombinant pour identifier la présence et la fonctionnalité du gène LacZ, qui code pour la β-galactosidase.Cette méthode de criblage permet d’identifier les clones contenant le gène d’intérêt.

Études cinétiques enzymatiques : L'ONPG est également utile pour étudier la cinétique de l'enzyme β-galactosidase.En mesurant la vitesse de réaction enzyme-substrat à différentes concentrations de substrat, il est possible de déterminer des paramètres cinétiques tels que les constantes de Michaelis-Menten (Km) et les vitesses de réaction maximales (Vmax).