4-Nitrophényl bêta-D-galactopyranoside CAS : 200422-18-0

Effet : L’ONPG est un substrat utilisé spécifiquement pour détecter la présence et l’activité de l’enzyme β-galactosidase. Lorsque la β-galactosidase est présente et active, elle clive l’ONPG en deux produits : l’o-nitrophénol et un dérivé du galactose. La libération d’o-nitrophénol entraîne un changement de couleur jaune, mesurable par spectrophotométrie.

Applications : L'ONPG a plusieurs applications dans la recherche en biologie moléculaire et en biochimie :

Détermination de l'activité β-galactosidase : L'ONPG est couramment utilisé pour mesurer et quantifier l'activité de l'enzyme β-galactosidase. La vitesse de formation d'o-nitrophénol, directement proportionnelle à l'activité enzymatique, peut être mesurée par spectrophotométrie.

Expression et régulation des gènes : L’ONPG est fréquemment utilisé dans les expériences portant sur l’étude de l’expression et de la régulation des gènes. Il est souvent employé dans les tests de protéines de fusion, comme le système de fusion lacZ couramment utilisé, pour étudier l’expression des gènes sous le contrôle de promoteurs spécifiques. L’activité β-galactosidase mesurée grâce à l’ONPG renseigne sur le niveau d’expression des gènes.

Dépistage de l'activité β-galactosidase : l'ONPG peut être utilisé comme méthode de dépistage colorimétrique en génie génétique pour identifier la présence et la fonctionnalité du gène LacZ, qui code pour la β-galactosidase. Cette méthode de dépistage permet d'identifier les clones contenant le gène d'intérêt.

Études de cinétique enzymatique : L’ONPG est également utile pour étudier la cinétique de l’enzyme β-galactosidase. En mesurant la vitesse de la réaction enzyme-substrat à différentes concentrations de substrat, il est possible de déterminer des paramètres cinétiques tels que les constantes de Michaelis-Menten (Km) et les vitesses maximales de réaction (Vmax).