Phénylgalactoside CAS : 2818-58-8

Effet sur l'activité enzymatique : Le phénylgalactoside est couramment utilisé pour mesurer l'activité de l'enzyme β-galactosidase.Lorsque le phénylgalactoside est hydrolysé par la β-galactosidase, il libère du p-nitrophénol.L’accumulation de p-nitrophénol peut être mesurée quantitativement, fournissant ainsi un aperçu de l’activité de la β-galactosidase.Cet effet est exploité dans des applications telles que les tests enzymatiques et les systèmes de criblage.

Analyse de l'expression génique : le phénylgalactoside est souvent utilisé comme substrat dans les expériences de biologie moléculaire pour étudier l'expression génique.Le gène lacZ, qui code pour la β-galactosidase, est généralement fusionné avec des séquences régulatrices d'autres gènes d'intérêt.L'expression du gène lacZ et l'hydrolyse du phénylgalactoside par la β-galactosidase peuvent indiquer le modèle d'expression et le niveau du gène cible étudié.

Systèmes de criblage : le phénylgalactoside est un composant important des systèmes de criblage qui utilisent l’activité β-galactosidase.Un exemple largement connu est la méthode de criblage bleu-blanc, utilisée pour identifier les cellules recombinantes ou transformées dans les expériences de biologie moléculaire.Les colonies qui ont réussi à absorber l'ADN recombinant ou qui ont subi une recombinaison génétique exprimeront la β-galactosidase, conduisant à l'hydrolyse du phénylgalactoside et à la formation d'une couleur bleue.

Purification des protéines : dans certains cas, le phénylgalactoside peut être utilisé comme ligand pour la chromatographie d'affinité afin de purifier les protéines qui se lient spécifiquement à la β-galactosidase ou sont activées par celle-ci.La protéine d'intérêt peut avoir une étiquette d'affinité ou une étiquette de fusion contenant un domaine de liaison à la β-galactosidase.En faisant passer le mélange de protéines à travers une colonne avec du phénylgalactoside immobilisé, la protéine souhaitée peut être sélectivement retenue puis éluée.